viernes, 14 de mayo de 2010

practica#4

preparacion de medio de cultivo


Base de Agar Bordet Gengou.




objetivo:


realizar medio de cultivo de base de agar bordet gengou.




introduccion:


El medio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua. Usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos y vitaminas y aminoácidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algún regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias.






uso:


para identificacion de Bordetella pertussia y Microbacterium tuberculosis




regla:




4gr --------►100ml


x --------►120ml






material:


medio de cultivo bordet gengou


hagua destilada


gas Lp


matraz erlenmeyer


vaso de precipitado


agitador de cristal


balanza granataria


espatula


autoclave


mechero de bunsen


algodon


gasa


jeringa


sangre esteril 18 ml


algodon con alcohol




procedimiento:


se suspenden 4.8gr de polvo en 120 ml de agua destilada.


mezclamos y calentamos agitando frecuentemente el medio.


hervir durante 1 minuto.


esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presion) durante 15 min.


dejamos reposar y enfriar y agregar 18 ml de sangre esteril, colocandola


por la pared de el matraz y mezclamos asta que homogenize .


vaciamos 20ml de medio en cada caja petri ,tapamos y etiquetamos .






conclusion:


ralizamos la practica realizando un medio de cultivo parecido al agar sangre y realizamos la muestra extrayendo 18 ml de sangre de un compañero.

practica#3



realizar medio de cultivo
Agar verde brillante



objetivo:
elavoracion del medio de cultivo agar verde brillante

introduccion:
los sistemas mas importantes para la identificacion de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio, el material en el que crecen los microorganismos es en el medio de cultivoy el crecimiento de los microorganismos es el cultivo.






material:


*medio de cultivo agar verde brillante


*matraz erlenmeyer


*vaso de precipitado


*varilla de cristal


*espatula


*balanza granataria


*mechero de bunsen


*caja petril


*agua destilada


*gas lP


*autoclave


*gasa


*algodon




procedimiento:


colocamos 20.8gr de medio de cultivo en el matraz erlenmeyer con 360 ml de agua destilada .


mezclamos y calentamos hasta punto de ebullicion. esterilizamos en autoclave a 15 libras de presion durante 15 minutos.


vaciamos en cajas petril en volumen de 20 ml en cada caja .


etiquetamos y entregamos




conclusion:


trabajamos la mesa en equipo y no cometimos tantos

errores como en las practicas anteriores


PRACTICA#2

preparacion de medio de cultivo


base de caldo tetrationato




objetivo:


Que el alumno aprenda a realizar el medio de cultivo


base de caldo tetrationato correctamente.




introduccion:




Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.




MATERIAL :


Cristalería


Matraz erlenmeyer de 250 ml
Vaso de precipitado de 250 ml
Vaso de precipitado de 50 ml Vidrio de reloj
Probeta graduada de 100 ml

Varilla de cristal o agitador


Espátula


PESOS Y MEDIDAS


Balanza granataria


MATERIALES DE APOYO


Autoclave (técnica de esterilización)

Mechero de bunsen o mechero de Fisher

Torundas de algodón secas


Papel secante


Cinta masquintape


Agua destilada


GAS Lp






procedimiento:


rehidratar 46 gr de cultivo en un litro de agua destilada.


mezclar bien y calentar a ebullicion,suspender y dejar enfriar.


envasar en tubos de ensaye en volumenes de 10ml cada tubo .


NO ESTERILIZAR.


guardar en refrigerador.




conclusion:


en esta practica logramos realizar el medio con errores


pero asi trabajamos en equipo.


practica #1

preparación de medio de cultivo


agar nutritivo






Objetivo:


Que el alumno logre realizar correctamente el medio de cultivo Agar nutritivo



Introducción:


Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.





. MATERIALES PARA MEDIO DE CULTIVO
Cristalería


*Matraz erlenmeyer de 250 ml
*Vaso de precipitado de 250 ml
*Vaso de precipitado de 50 ml


*Vidrio de reloj
* Probeta graduada de 100 ml
*Varilla de cristal o agitador


*Espátula




PESOS Y MEDIDAS


*Balanza granataria




MATERIALES DE APOYO


*Autoclave (técnica de esterilización)
*Mechero de bunsen o mechero de Fisher
*Torundas de algodón secas


*Papel secante


*Cinta masquintape


*Agua destilada


*gas LP






Procedimiento:


Rehidratar 23 gr del medio en un litro de agua destilada (1000ml).


calentar hasta el punto de ebullición para disolver el medio por completo.esterilizar a 121 C( libras de presión) durante 15 minutos.


dejar reposar 3 minutos y vaciar en tubos de ensaye por cantidad de 10 ml cada tubo , taponiar y etiquetar .





conclusion:


Se obtuvo el medio de cultivo por medio de la regla de 3 , también se puede observar que la cantidad de agua agregada puesta en el medio de cultivo se evapora lo cual se tiene que agregar agua extra para cada caja petri.


corpocultivo

coprocultivo
Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entéricas patógenas. Muestra adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es más fácil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administración de antimicrobianos.

Para realizar el examen se emplean heces que no tengan más de media hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodón. Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1º ml de un líquido conservador, o bien, depositar en éste el hisopo rectal.

El líquido o solución conservadora se prepara de la siguiente manera:
NaCl 4.2 g
K2HPO4 3.1 g
KH2PO4 1.0 g
Glicerol 300 ml
H2O 700 ml

Este líquido, al que se le añade rojo fenol, se distribuye en tubos, que se esterilizan en autoclave durante 20 minutos a 120° C. Las muestras tomadas mediante hisopado rectal pueden ser portadas en tubos que contengan medio de Cary-Blair, colocando el hisopo en su interior.

Medios de cultivo

Para facilitar el aislamiento de bacterias entéricas patógenas se utilizan medios de enriquecimiento y medios selectivos. Los más empleados son los siguientes:

Medios de enriquecimiento

Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Este método posee la propiedad de inhibir o destruir el crecimiento de Salmonella y Shigella. Contiene, entre otros, tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo, el cuál actúa sobre el medio para determinados géneros, en especial Salmonella; de aquí su uso como paso previo a la siembra en placas de medios selectivos.

Caldo con selenito (Leifson). Posee selenito, ácido de sodio que inhibe parcialmente al grupo coliforme durante las primeras horas de cultivo (12 a 24 horas), y permite el rápido desarrollo de salmonelas y shigellas.

Selenito sódico 4 g

Peptona 5 g

Manitol 4 g

Fosfato disódico anhidro (Na2HPO4 ) 10 g

Agua destilada 1000 ml

2. Medios selectivos

Agar SS (salmonella-shigella). Este medio selectivo, empleado para aislar Salmonella y Shigella ejerce una buena inhibición sobre agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patógenos gramnegativos. Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra de materiales provenientes de medios enriquecedores, como caldo tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa, citrato y tiosulfato sódico, citrato férrico, verde brillante y rojo neutro como indicador. Shigella y Salmonella, como también otros agentes que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro. Conviene señalar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos.

Agar MacConkey. Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las cuales inhiben la flora grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias incoloras.

Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato). Medio indefinido, mixto, sólido y diferencial. En él crecerán microorganismos quimioheterótrofos formadores de sulfhídrico a partir de sulfato. En la receta aparece rojo fenol, en el cual actúa el indicador de pH.

Se pueden presentar tres tipos de anomalías intestinales:

Infección intestinal ! Debida a la producción de cambios ecológicos por la acción directa del microorganismo.

Intoxicación alimentaria ! Producida indirectamente por el microorganismo a través de la producción de toxinas, antes de la ingestión por la persona.

Toxiinfeción alimentaria ! Producida por el microorganismo a través de la producción de toxinas, después de su ingestión por la persona.

Hay que tener en cuenta la biota presente en condiciones normales. Así:
Lactantes (alimentación materna).

Altos niveles de Bifidobacterium
Bajos niveles de E.coli y Enterobacterias

Lactantes (alimentación artificial)

Altos niveles de grampositivos

Bajos niveles de Bifidobacterium

Niños y adultos

Predominancia de Anaerobios

Anaerobios Facultativos y Aerobios:

% E.coli " 80%

% Enterococos " 14%

% Staphylococcus y Streptococcus " 4%

% Otros " 2%

" Dieta rica en proteínas: predominancia de biota Grampositiva.

" Dieta rica en hidratos de carbono: predominio de Gramnegativa.

II. TOMA Y OBSERVACIÓN DE MUESTRAS

Una vez tomada la muestra como se mencionó anteriormente procedemos a la observación de la muestra. Ésta ha de hacerse a dos niveles:

Macroscópicamente.

Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir.
Microscópicamente.

Sometemos la muestra a una tinción simple con azul de metileno. Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. Así:

" presencia de leucocitos ! la infección ha cursado con inflamación intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Salmonella, Shigella o ETEC.

" ausencia de leucocitos ! significa que no ha habido inflamación por lo que la infección puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae).

III. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

Vamos a realizar un análisis de heces. En primer lugar haremos un examen macroscópico de las heces y a continuación sembraremos en agar SS, en agar XLD y en agar MacConkey. Paralelamente vamos a sembrar E.coli en estos dos medios. Finalmente haremos una tinción de Gram.
Pruebas Serologicas
Definición de Serología: Es un examen del líquido seroso de la sangre (suero, el líquido transparente que se separa cuando la sangre se coagula) que se utiliza para detectar la presencia de anticuerpos contra un microorganismo.
En otras palabras, la serología se refiere al estudio del contenido de anticuerpos en el suero. Ciertos microorganismos estimulan al cuerpo para producir estos anticuerpos durante una infección activa. En el laboratorio, los anticuerpos reaccionan con los antígenos de formas específicas, de tal manera que se pueden utilizar para confirmar la identidad del microorganismo en particular.
Existen varias técnicas serologicas que se utilizan dependiendo de los anticuerpos de los cuales se sospecha entre las que se pueden mencionar aglutinación, precipitación, fijación del complemento, anticuerpos fluorescentes y otras.Los laboratorios de inmunología y serología se concentran en lo siguiente:Identificar anticuerpos (proteínas hechas por una clase de glóbulo blanco como respuesta a un antígeno, una proteína extraña en el cuerpo).
Enterobacterias
son bacilos gram(-).
son las bacterias de mayor tamaño que colonizan al hombre y presentan variada morfología, son anaerobios y metabolicamente activos, que crecen en medios simples y no forman esporas.
la mayoría son móviles y unas pocas son capsuladas (especies E.coli y klebsiella).
sus envolturas son las típicas de todo gram (-).
los géneros importantes son:
escherichia,shigella,salmonella,klebsiella,serratia,enterobacter,proteus,neiseria.
pueden vivir libres en la naturaleza y abitalmente forman parte de la flora normal del colon humano y piel.
posen tres grupos antigenos que se usan para su clarificación :
*flagelares "h" que son termolabiles.
*cápsulas "k"
*somáticos "o"

2 parcial

Centro de Bachillerato Tecnológico
industrial y de servicios
no.155
PROCESAR CULTIVOS BACTERiOLOGICOS
Víctor Manuel Alfaro Lopez
4l2m
mesa #2
Rebeca Rodriguez Mexicano
2 parcial